分光光度法是指應用
721光度計的分析方法，具有靈敏、準確、快速及選擇性好等特點。通常所測樣品溶液濃度下限可達10-6~10-5mol/L，適用于測定食品中的微量組分（如肉制品中的亞硫酸鹽、糖果中的二氧化硫等）。光度計長時間不用時，暗箱里通常需要放置干燥器，用于保持暗箱室內(nèi)的空氣干燥。如果在預熱時將暗箱蓋打開，會使其空氣濕度發(fā)生變化，影響測量結(jié)果的準確性。
721光度計的測量條件選擇說明：
一、顯色反應及顯色條件的選擇
進行比色分析或光度分析時，首先要把待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物，然后進行比色或光度測定。將待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應叫顯色反應，與待測組分形成有色化合物的試劑稱為顯色劑。
1.顯色反應的選擇
顯色反應分絡(luò)合反應和氧化還原反應兩類，絡(luò)合反應是最主要的顯色反應。選用的原則是：
?、龠x擇靈敏的顯色反應。摩爾吸光系數(shù)ε的大小是顯色反應靈敏度高低的重要標志，因此應當選擇生成的有色物質(zhì)的ε較大的顯色反應。一般來說，當ε為104-105時，可認為該反應靈敏度較高；
?、诒M可能選擇選擇性好的顯色劑。即顯色劑僅與一個組分或少數(shù)幾個組分發(fā)生顯色反應；
?、埏@色劑在測定波長處無明顯吸收。通常把兩種有色物質(zhì)最大吸收波長之差稱為對比度，一般要求顯色劑與有色化合物的對比度在60nm以上；
?、芊磻傻挠猩衔锝M成恒定，化學性質(zhì)穩(wěn)定。
2.顯色條件的選擇
吸光光度法測定的是顯色反應達到平衡后溶液的吸光度，因此要得到準確的結(jié)果，必須從研究平衡著手，了解影響顯色反應的因素，控制適當?shù)臈l件，使顯色反應*和穩(wěn)定。
?、俑鶕?jù)溶液平衡原理，有色絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)越大，顯色劑過量越多，越有利于待測組分形成有色絡(luò)合物。但是過量顯色劑的加入有時會引起副反應，對測定反而不利；
②酸度對顯色反應的影響是多方面的。一種金屬離子與某種顯色劑反應的適宜酸度范圍是通過實驗來確定的。確定的方法是固定待測組分及顯色劑的濃度，改變?nèi)芤簆H值，測定其吸光度，作出吸光度-pH值關(guān)系曲線，選擇曲線平坦部分對應的pH值作為測定條件；
?、埏@色反應一般在室溫下進行，有的反應需要加熱，以加速顯色反應，使之進行*；
?、艽蠖鄶?shù)顯色反應需要經(jīng)過一定的時間才能完成，其長短與溫度的高低有關(guān)，也會受到空氣的氧化或發(fā)生光化學反應使眼色顏色減弱。因此必須通過實驗作出在一定溫度下的吸光度-時間關(guān)系曲線，得到適宜的顯色時間。
三、干擾的消除
1.干擾的類型光度分析中，共存離子如本身有顏色，或與顯色劑作用生成有色化合物，都將干擾測定。
?、俑蓴_離子本身有顏色；
?、诟蓴_離子本身無顏色，但能與顯色劑反應生成穩(wěn)定的配合物。若生成的配合物有色則直接干擾測定，若生成的配合物無色，也降低了顯色劑的濃度，影響被測離子與顯色劑的反應，而產(chǎn)生誤差；
?、鄹蓴_離子與被測離子反應生成配合物或沉淀，影響被測離子的測定。
2.消除干擾的方法
?、倏刂迫芤核岫?；
?、诩尤胙诒蝿┡c干擾離子形成更穩(wěn)定的化合物，使干擾離子不再產(chǎn)生干擾；
?、劾镉脜⒈热芤合承┯猩蓴_離子的影響；
?、苓x擇適當?shù)墓ぷ鞑ㄩL以消除干擾；
?、莶捎眠m當?shù)姆蛛x方法。
